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上海过氧化氢消毒服务:生物安全实验室内表面和仪器表面消毒方法

颂通生物 发布时间:2021-09-12 11:01:15

上海过氧化氢消毒服务:生物安全实验室内表面和仪器表面消毒方法

目前,用于生物安全实验室内表面和仪器表面消毒方法主要有: 乙醇擦拭、过氧乙酸擦拭、含氯消毒剂喷洒、甲醛熏蒸等方法。室内空气消毒常用紫外线照射、化学消毒液( 如过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯) 气溶胶喷雾等。这些常规方法副作用和损坏性明显,很难达到灭菌水平。近年来,西方国家将制药工业中无菌加工生产线的灭菌技术,应用到生物安全实验室内表面灭菌处理,但国内相关报道很少。

如何观察过氧化氢蒸汽对生物安全实验室内台面、换笼机内、墙面、地面和室内空气的灭菌效果呢?



使用的过氧化氢原液 pH 值为 2. 55、含量为346. 5 g /L,灭菌器为过氧化氢蒸汽灭菌器,生物安全实验室为军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室。

方法

一.试验菌片的制备

取本实验室保存的枯草杆菌黑色变种 ( ATCC9372) 菌 种 管,经 过 分 离、纯 化 和 增 菌 培 养,参 照2002 年版《消毒技术规范》细菌芽孢培养制备程序,生产枯草杆菌黑色变种芽孢悬液,用胰蛋白胨大豆肉汤 ( TSB) ( 不添加氯化钠) 稀释制备成试验用芽孢悬液。取 10 μl 芽孢悬液,滴染平纹棉布片 ( 10 mm × 10 mm) 上,干燥后备用。

二.菌片的布置
按生物实验室安全管理要求,穿戴防护用品经人流通道进入实验室。于消毒前对实验室的实验台面、换笼机内、墙面、地面等处放置染菌布片,作为检测点。记录室内温度和湿度。

三.过氧化氢气体发生器系统的准备

过氧化氢气体发生器系统主要由主设备和控制台组成,将主设备推进灭菌房间的中间或能最大限度地将气流分配给任何小房间的地方。将控制台放在待灭菌房间的门外,用电缆将其与主设备连接。然后给主设备加注过氧化氢液体,且固定过氧化氢液体输送流量为 20 ml /min,用手持式红外测距仪测量房间的体积,然后密闭门窗。根据待灭菌房间的体积,在主控制台设置预热时间,汽化时间和密闭保持时间。启动灭菌周期。

四.杀菌效果评价验证试验


1.过氧化氢不同用量对室内不同位置表面灭菌效果验证试验

在体积为 40 m3 生物安全实验室内,分别以 4 ml /m3、8 ml /m3、10ml /m3、12 ml/m3、15ml /m3 过氧化氢液体用量,将过氧化氢原液经颂通生物过氧化氢气体发生器产生过氧化氢蒸汽,密闭作用 60 min。将室内不同位置表面放置的染菌布片以无菌操作方法取下,放入含5 000 mg /L 硫代硫酸钠的普通营养肉汤中和剂培养液试管内,为试验组,置 37℃温箱培养 7 d 后,观察生物培养结果。同时,取未经过灭菌处理的同批制备的染菌布片 3 个,分别放入 3 支相同的培养液试管内,作为阳性对照;将未加染菌载体的普通营养肉汤中和剂培养液试管,作为阴性对照,与试验组同时培养。另取 2 个布片进行活菌培养计数,作为消毒前载体染菌量对照组。试验重复 3 次。


2.不同作用时间对室内不同位置表面灭菌效果验证试验

在体积为 40 m3生物安全实验室内,将过氧化氢原液以 12 ml /m3用量经 KINO过氧化氢气体发生器产生过氧化氢蒸汽,分别密闭作用 10 min、20 min、40 min、60 min。将室内不同位置表面放置的染菌布片以无菌操作方法取下,放入与上述相同的普通营养肉汤中和剂培养液试管内,为试验组,置 37℃ 温箱培养 7 d 后,观察生物培养结果。同时,设置阳性对照和阴性对照以及染菌量对照组。试验重复 3 次。


3.过氧化氢蒸汽对不同体积房间的灭菌效果验证试验

在室内体积为 40 m3和 190 m3生物安全实验室内,将过氧化氢原液以 12 ml /m3用量经颂通生物过氧化氢气体发生器产生过氧化氢蒸汽,密闭作用 60 min。将室内不同位置表面放置的染菌布片以无菌操作方法取下,放入与上述相同的普通营养肉汤中和剂培养液试管内,为试验组,置 37℃ 温箱培养 7 d 后,观察生物培养结果。同时,设置阳性对照和阴性对照以及染菌量对照组。试验重复 3 次。


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